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描述核酸染料使用方法
點擊次數:80 發布時間:2018-12-08
   描述核酸染料使用方法
  核酸染料采用瓊脂糖電泳檢測DNA時,GoldView II與核酸結合后能產生很強的熒光信號,其靈敏度比EB強5-10倍,使用方法與之完全相同。GoldView II與核酸結合后,大吸收峰為497nm,另外,其在254nm處也有一強吸收峰,發射波長為520nm,在紫外透射光下雙鏈DNA呈現綠色熒光,而且也可用于染RNA。
  通過Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠睪丸精母細胞染色體畸變試驗,致突變性結果均為陰性;而溴化乙錠(EB)是一種強致癌劑。因此用Goldview II代替EB不失為一種明智的選擇。
  核酸染料為DMSO溶解,低溫時為固體狀態,溫度到達20℃以上即可融化。
  核酸染料使用方法:
  由于GoldView II敏感度比EB高數倍,使用時,請將商品化的Marker用1×DNA Loading Buffer作5-10倍的稀釋,上樣1-10µl,以得到較好的結果(通常稀釋10倍后上樣5ul)。對于待檢測樣品,通常僅需1-2µl即可。如果濃度較高,也須作一定倍數稀釋,否則會造成條帶不整,影響遷移速率。凝膠回收請選擇點染方法。
  1.將50ml瓊脂糖凝膠溶液(濃度一般為0.8%~2%)在微波爐中融化。
  2.冷卻至不燙手時加入10-15µl GoldView II(不能少于10ul),輕輕搖勻,避免產生氣泡。
  3.倒膠,待瓊脂糖凝膠完全凝固后上樣電泳。
  4.電泳完畢在紫外燈下觀察。若使用數碼相機照像記錄,則關閉相機的閃光燈,放在自動檔即可;若使用凝膠成像系統照相,通過調節光圈、曝光時間,選擇合適的濾光片,可得到成像清晰的照片。

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